TÉCNICAS MOLECULARES EN DENGUE CLÁSICO

El ADN genómico de la levadura MP36 fue obtenido a partir de un cultivo de 200 mL de YPD y purificado utilizando el Kit Wizard Genomic ADN Purification System de Promega, que fue utilizado como control negativo en el análisis del patrón de integración del gen de la envoltura de dengue 4. Los ADN de 36 clones recombinantes fueron purificados por el mismo kit antes mencionado. La detección del gen de la envoltura se realizó por el método de hibridación Dot-Blot, utilizando como sonda el propio gen de la envoltura E del virus dengue 4 obtenido previamente por PCR (polymerase chain reaction, siglas en inglés de reacción en cadena de la polimerasa). El chequeo de los distintos ADN se realizó mediante una electroforesis en gel de agarosa horizontales a  una concentración de 0,8 %, utilizando como buffer de corrida TBE (Tris-borato 40 mM, EDTA 2 mM pH 8,0).

La secuenciación del gen obtenido a partir de PCR de una colonia se realizó de forma semiautomática utilizando oligonucleótidos sintetizados en el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología (CIGB).

5’ GGGAATTCT ATGCGATGCTTAGGAGTAGGA 3’ 

5’ GGGAATTCTTAAAACATCTTGCCAATGGAACT 3’

ver mas en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0375-07602005000300002