ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA

Es un tipo de ADN  formado por la unión de dos moléculas  de diferente origen. Se distingue entre el ADN recombinante natural, y el ADN recombinante sintético. El primero es el que se genera de manera biológica dentro de los organismos. El ADN se recombina de manera natural mediante procesos como la reproducción sexual, la transformación bacteriana y la infección viral.

Los virus transfieren ADN entre bacterias y entre especies eucariotas, los virus, que son poco más que material genético envuelto en una cubierta con proteínas, transfieren su material genético durante la infección. Dentro de la célula infectada, los genes se replican y dirigen la síntesis de proteínas virales. Los genes replicados y las nuevas proteínas virales se ensamblan dentro de la célula y forman nuevos virus que, a su vez, son liberados para infectar a otras células. Por lo general, un virus determinado solo infecta y se replica en las células de ciertas especies bacterianas, animales o vegetales. Durante muchas infecciones virales, las secuencias del ADN viral se incorpora a uno de los cromosomas de la célula huésped. Este ADN puede permanecer ahí durante días, meses o incluso años. Cuando se producen nuevos virus a partir del ADN incorporado, estos pueden integrar por error genes humanos en el genoma del virus; de este modo se crea un virus recombinante

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http://books.google.com.ec/books?id=uO48-6v7GcoC&pg=PA244&lpg=PA244&dq=adn+recombinante+natural+en+animales&source=bl&ots=vVqAHR1OZy&sig=9Es5OgTCTqM5nGAMMrOTuQ61gpU&hl=es&sa=X&ei=RS6gUPv3FIKQ9QSQwIDYCg&ved=0CCgQ6AEwAg#v=onepage&q=adn%20recombinante%20natural%20en%20animales&f=false
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ADN recombinante

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OTROS TIPOS DE PRUEBAS MOLECULARES PARA DENGUE CLASICO

Varias  nuevas técnicas de diagnóstico molecular se han desarrollado y se ha probado su utilidad para el diagnóstico del dengue

Hibridación del ácido nucleico. Se realiza a partir del RNA extraído del virus del dengue procedente de los sobrenadantes de cultivos celulares o de grupos de mosquitos como Aedes albopictus.

Inhibición de la Hemoaglutinación (IH). Este método ha tenido y tiene utilidad para la detección de anticuerpos contra dengue, siendo de gran valor para estudios seroepidemiológicos y para distinguir infecciones primarias de secundarias.

Fijación de Complemento (FC).  La prueba se basa en el principio que el complemento será consumido durante la reacción antígeno – anticuerpo.

Prueba de Neutralización (PN). Es la prueba serológica más sensible y más específica para la diagnóstico de la infección por el virus del dengue, y se detecta por un período largo. 

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http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1726-46342005000300009
https://encrypted-tbn2.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcThyjz2FC66c2-VUXdpdP1hMTHqMAQ2SgmkhoV11AHY6o070ra-

TÉCNICAS MOLECULARES EN DENGUE CLÁSICO

El ADN genómico de la levadura MP36 fue obtenido a partir de un cultivo de 200 mL de YPD y purificado utilizando el Kit Wizard Genomic ADN Purification System de Promega, que fue utilizado como control negativo en el análisis del patrón de integración del gen de la envoltura de dengue 4. Los ADN de 36 clones recombinantes fueron purificados por el mismo kit antes mencionado. La detección del gen de la envoltura se realizó por el método de hibridación Dot-Blot, utilizando como sonda el propio gen de la envoltura E del virus dengue 4 obtenido previamente por PCR (polymerase chain reaction, siglas en inglés de reacción en cadena de la polimerasa). El chequeo de los distintos ADN se realizó mediante una electroforesis en gel de agarosa horizontales a  una concentración de 0,8 %, utilizando como buffer de corrida TBE (Tris-borato 40 mM, EDTA 2 mM pH 8,0).

La secuenciación del gen obtenido a partir de PCR de una colonia se realizó de forma semiautomática utilizando oligonucleótidos sintetizados en el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología (CIGB).

5’ GGGAATTCT ATGCGATGCTTAGGAGTAGGA 3’ 

5’ GGGAATTCTTAAAACATCTTGCCAATGGAACT 3’

ver mas en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0375-07602005000300002

EPIGENÉTICA EN EL DENGUE CÁSICO

Huésped: 

• epigenómico: las hembras del mosquito Aedes aegypty se alimentan de sangre de mamíferos lo que ayuda en el desarrollo de sus huevos.
• post transcripcional: la desactivación del microARN - MIR-275 impide la digestión de la sangre.

Virus: 

• epigenómico:  al impedir la digestión de sangre de las hembras los huevos no se desarrollan y el virus no tiene oportunidad de desarrollarse correctamente e impide la transmisión e infección a los humanos.

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http://articulos.sld.cu/dengue/2010/12/20/laboratorio-identifica-molecula-microarn-que-controla-la-alimentacion-a-partir-de-la-sangre-y-el-desarrollo-de-los-huevos-en-el-mosquito-transmisor-del-dengue/#more-335

http://www.neocultivos.com/dengue/aedes_aegypti_d.jpg

http://www.scielo.org.pe/img/revistas/rins/v22n3/a09fig02.jpg

https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEgwJyE-gvLI_ECcPP8CMzFEQGnGb-__hCi0LSmEUwbDjEbFA1ffaujj13STlBMAtD5YYc-sDNGYfAw5AVzhnb1FAhea0L45gqqjAjIgIVOkQAhpQfFDJ47qwiqYV13MfEjbUbD_CkbJPqQ/s1600/ciclo+de+vida+aedes.jpg

PCR Y DENGUE CLÁSICO

La PCR ha revolucionado el diagnóstico virológico. Se han empleado diferentes protocolos, de los cuales se destacan aquellos que detectan la presencia del gen que codifica la envoltura viral o alguno de los genes que codifican las proteínas no estructurales. La PCR anidada (nested/PCR), de mayor sensibilidad es ampliamente utilizada.

Recientemente, se han impuesto sistemas más sensibles que permiten detectar y cuantificar el ácido nucleico viral presente en el suero aun en presencia de un bajo número de copias. La PCR en tiempo real ha sido aplicada con éxito en la detección y cuantificación de dengue en muestras de suero y linfocitos de sangre periférica. El ensayo se realiza en un solo vial lo que disminuye las posibilidades de contaminación, la señal que se produce en las muestras positivas se monitorea en tiempo real, esto permite a su vez la cuantificación del ácido nucleico.

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http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S0375-07602008000100001&script=sci_arttext

 http://www.fitolab.com.mx/fitolabSiteRecs/esquemaPCR.jpg

                                                               ¿Que es la PCR?

ver en youtube: http://www.youtube.com/watch?v=V9PtQlp-e7g

Pasos de la PCR

 ver mas en: http://www.youtube.com/watch?v=Kuy4PDb6bdU